【Wako】Phos-tag™ 样品预处理攻略

【Wako】Phos-tag™ 样品预处理攻略

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wako
wako Phos-tag™
Phos-tag™ SDS-PAGE容易受样品中EDTA、无机盐、表面活性剂等的影响，造成条带弯曲、变形。因此上样前样品需要进行预处理。
没进行预处理的示例
▍▏材料准备
- 待处理蛋白样品*
- 1% DOC（脱氧胆酸钠）
- TCA（三氯乙酸），保存在4℃
- 预冷丙酮
*样品中含有的Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）、蔗糖等可能会引起沉淀
▍▏预处理图解
STEP1：在每200 μL的蛋白样品中加入5 μL 1% DOC

STEP2：涡旋混匀并在37℃下孵育10分钟


STEP3：加入200 μL 20% TCA

STEP4：涡旋混匀并置于冰上5分钟


STEP5：4℃ 15000 rpm 离心10分钟

STEP6：去上清

STEP7：加入500 μL预冷丙酮

STEP8：简单混匀

●  重复步骤5-8
Step 5：4℃ 15000 rpm离心10分钟
Step 6：去上清（丙酮）
Step 7：加入500μL预冷丙酮
Step 8：简单混匀
Step 9：4℃ 15000 rpm离心10分钟
STEP10：吸出丙酮，小心避开沉淀
STEP11：干燥10分钟

STEP12：加入SDS-PAGE样品缓冲液

STEP13：简单混匀
注意
· 若沉淀不能完全溶于缓冲液，加入1M Tris·Cl以提高pH

STEP14：超声处理

STEP15：100℃ 加热5-10分钟
※ 仅供实验使用，不可用于临床诊断。

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