【Promega】MagneGST™ Pull-Down系统和CheckMateTM/Flexi® 哺乳动物双杂交系统

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promega V8870 C9360 L1001 C8640 C9380 C9370 C9351 C9341 C9331

MagneGST™ Pull-Down System (GST PullDowns)

说明

MagneGST™ Pull-Down System (MagneGST™ Pull-Down系统 ) 被设计用于研究下述两种蛋白之间的相互作用：即细菌表达的 GST- 融合蛋白和 TNT® 系统表达的捕获蛋白。捕获蛋白从 TNT®Quick Coupled Transcription/Translation Reaction 中合成，被固定在 MagneGST™ 磁颗粒的诱饵蛋白 (GST- 融合蛋白 ) 所捕获。洗掉非特异性结合的蛋白后，即可对捕获蛋白进行分析。捕获蛋白的分析方法有多种，可以在 TNT® Quick 反应时将放射性同位素标记的甲硫氨酸掺入到产物蛋白中，然后进行 SDS-PAGE 和放射性自显影分析；

也可以在 TNT® 反应时加入非同位素标记的甲硫氨酸，然后使用蛋白特异性抗体进行 Western blotting 分析。

储存条件：将 TNT® T7 Quick Master Mix 和甲硫氨酸储存于 -70℃。

将 RQ1 RNase-Free DNase 储存于 -20℃。将无核酸酶的水、MagneGST™ Glutathione Particles、MagneGST™ Binding/Wash Buffer 和 Cell Lysis Reagent 储存于 4℃。

储存条件：将 TNT® T7 Quick Master Mix 和甲硫氨酸储存于 -70℃。将 RQ1 RNase-Free DNase 储存于 -20℃。将无核酸酶的水、MagneGST™ Glutathione Particles、MagneGST™ Binding/Wash Buffer 和 Cell Lysis Reagent 储存于 4℃。

CheckMate™/Flexi® Vector Mammalian Two-Hybrid System

说明

CheckMate™/Flexi® Vector Mammalian Two-Hybrid System(CheckMateTM/Flexi® 哺乳动物双杂交系统) 提供一种手段，可用于确定、印证和研究两种蛋白或结构域间可能的相互作用，也可用于构建稳定的细胞系进行基于细胞的检测。哺乳动物来源的目标蛋白，系统可在模仿细胞自然环境的情况下表达并进行翻译后修饰。在酵母双杂交系统中，目标蛋白 (" X ") 与 DNA 结合结构域区融合，另一蛋白 ("Y ") 与转录激活结构域融合。

该系统基于三种质粒共转染进入哺乳动物细胞，而且每种质粒皆有独一无二的特点。pFN10A(ACT) Flexi® Vector (pFN10A(ACT)Flexi® 载体 ) 在克隆位点上游含有疱疹单病毒 VP16 的转录激活结构域；pFN11A (BIND)Flexi® Vector (pFN11A(BIND)Flexi® 载体 ) 在克隆位点上游含有酵母 GAL4DNA 结合结构域；pFN11A(BIND) Flexi® Vector (pFN11A(BIND)Flexi® 载体 ) 在 SV40 启动子的调控下可表达海肾萤光素酶，进而可校准转染效率的不同。第三个载体pGL4.31[luc2P/Gal4UAS/Hygro] Vector 含有五个位于最小 TATA 盒上游的 GAL4 结合位点，该位点位于萤火虫萤光素酶基因上游，作为蛋白 X 与蛋白 Y 相互作用的报告基因。

CheckMate™/Flexi® 哺乳动物双杂交载体系统区别于以前的CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统，可与 Flexi® 载体系统兼容，这样在不同的 Flexi® 载体间直接克隆和迅速有效的高保真转移蛋白编码区成为可能。

特点

• 哺乳动物表达系统：能够有选择的研究细胞系中蛋白间的相互作用。蛋白能更好地保持其天然构象。转录后修饰能更好的保持，如糖基化，磷酸化和酰基化等。

• 通用性：载体基于 Flexi® 克隆技术设计，在功能性蛋白质组学研究中可方便的转移蛋白编码区。

• 方便：Dual-Luciferase® Reporter Assay System 可用于此系统的检测。

储存条件：储存于 -20℃。