【Promega】HaloLink™ Resin和HaloTag® 哺乳动物 Pull-Down 和标记系统

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HaloLink™ Resin

说明

HaloLink™ Resin(HaloLink™ 树脂) 提供了一种共价结合HaloTag® 融合蛋白，并将其定向结合到固相表面的方法。这种树脂由结合由 HaloTag® 配基的 Sepharose® 微球组成，该微球可以特异而迅速地结合 HaloTag® 融合蛋白。这种树脂具有高结合容量。由于是共价结合，HaloTag® 融合蛋白不能从树脂上洗脱下来，这一特性使得非特异结合的蛋白得以被充分洗涤去除，而没有洗脱掉HaloTag® 融合蛋白的风险。其结合的速率是非常快的，与生物素 -链霉亲和素的结合速率相当。

HaloLink™ 树脂可有多种用途，包括：( 体内和体外 ) 蛋白 :蛋白相互作用的检测与分析、被固定的 HaloTag® 融合蛋白的酶活力检测、以及与蛋白水解反应相偶联的一步法融合蛋白纯化。现在已有多种载体用于在细菌、哺乳动物细胞以及无细胞表达系统中表达 HaloTag®融合蛋白。如需更多信息，请参见 HaloTag® Flexi® 目录页面 (www.promega.com/catalog)。

HaloTag® 技术提供了一种快速而方便的方法来检测 HaloTag®融合蛋白的表达，以及监测 HaloLink™ 树脂固定蛋白的效率，使用HaloTag® TMR 配基进行标记，然后进行 SDS-PAGE 分析。实验操作指南可在 HaloLink™ 树脂的操作手册 #TM250 中找到。

特点

• 共价结合：允许严格的洗涤条件，在不解离结合的 HaloTag® 融合蛋白的同时，将非特异性本底减至最低。

• 结合快速：增强了蛋白 : 蛋白相互作用的检测，使得蛋白在低浓度即可结合。

• 定向固定：允许结合蛋白发挥最大的酶活力。

• 结合容量大：每毫升静置的树脂可结合 >7mg 的 HaloTag® 融合蛋白。

注意：当哺乳动物细胞的蛋白表达过程中用到蛋白酶抑制剂混合物时，我们推荐使用 BaculoGold® 蛋白酶抑制剂混合物 (BD Biosciences, Cat.# 554779)。某些蛋白酶抑制剂混合物，尤其是含4-(2- 氨乙基 ) 苯磺酰氟盐酸盐 (AEBSF) 时，结合效率会降低。

储存条件：储存于 4℃。

HaloTag® Mammalian Pull-Down Systems

说明

HaloTag® Mammalian Pull-Down and Labeling System(HaloTag® 哺乳动物 Pull-Down 和标记系统，Cat.# G6500和 G6504) 用于捕获和纯化细胞内成对的和高等级的蛋白复合物，包括瞬时的或弱相互作用的伴侣蛋白。该系统包含 HaloTag®TMRDirect™ Ligand(HaloTag® TMRDirect™ 配基 )，可以用同一种载体研究相关的细胞定位和实时成像，以进一步理解蛋白的全部功能。

而 HaloTag® Mammalian Pull-Down System 不包含 HaloTag®™ RDirect™ 配基。

依赖于人巨细胞病毒 (CMV) 即刻早期增强子、T7 或 SP6 RNA聚合酶启动子，HaloTag® Control Vector (HaloTag® 对照载体 ) 可以在哺乳动物细胞、大肠杆菌或体外表达系统中表达 HaloTag® 蛋白。

它可用作任何 HaloTag® 实验系统的对照，也可用于哺乳动物细胞中HaloTag® 的稳定和瞬时表达；如想获得 HaloTag® 的稳定表达，共转染的载体需要含有选择标记。

Protease Inhibitor Cocktail, 50X ( 蛋白酶抑制剂混合物，50 X)是针对不同靶标蛋白酶的六种不同蛋白酶抑制剂的混合物。该产品以冻干的形式提供，可用 100% 乙醇或 DMSO 重悬。

Mammalian Lysis Buffer ( 哺乳动物裂解缓冲液 ) 是为 HaloTag®哺乳动物表达系统[如HaloTag® Mammalian Pull-Down and Labeling Systems 以及 HaloCHIP™ System (Cat.# G9410)] 而设计的，配方中含有 50mM Tris-HCl ，150mM NaCl，1% Triton® X-100 和 0.1%脱氧胆酸钠 (pH 7.5)。

特点

• 直接从裂解液中快速、高效地共价捕获成对的和高等级的蛋白复合物：增强了对蛋白伴侣的捕获，包括瞬时相互作用。

• 纯度高，背景低：提高了蛋白鉴定的精度；共价连接使得诱饵蛋白在需要的时候可以保留下来。

• 能用荧光标记相同的基因融合物：将复合物捕获和细胞定位联系起来。

• 与下游所有的分析方法都兼容：可自由地在各种应用中鉴定复合物，包括质谱。

储存条件：

将10X TBS 缓冲液和 SDS洗脱缓冲液储存于室温，HaloLink™ Resin (HaloLink™树脂 )和Mammalian Lysis Buffer( 哺乳动物裂解缓冲液 ) 储存于 4℃，Protease Inhibitor Cocktail ( 蛋白酶抑制剂混合物 ) 和 HaloTag® TMRDirect™ Ligand (HaloTag®TMRDirect™ 配基 ) 储存于 -20℃。