【Promega】蛋白酶体募集
大多数真核蛋白在泛素化完成后，通过 26S 蛋白酶体介导的募集和相关过程发生降解。NanoBRET™ 可对活细胞中的这一过程进行监测。由于蛋白质稳定性或降解的动力学因素，最佳 NanoBRET™ 检测方案配置为将 NanoLuc® 与靶蛋白融合作为发光供体，将 26S 蛋白酶体成分作为荧光受体。得益于 NanoBRET™ 分析中的发光 / 荧光比的数据分析方式，您可以在观察蛋白酶体募集的同时监测目标蛋白水平。在众多蛋白酶体亚基中，当 N 端与 HaloTag® 融合时，PSMD3（26S 蛋白酶体调节亚基 3）为该进行该通用型检测的最佳蛋白酶体蛋白。该受体融合物可采用 HaloTag®NanoBRET™ 618 Ligand 将其标记为荧光受体。本检测也可使用内源性标记的靶蛋白 - 供体融合进行。
▍▏检测工作流程
▍▏多泛素化靶蛋白的蛋白酶体募集研究
使用 PROTAC MZ-1（1 μM）进行处理 后，26S 蛋白酶体中 HiBiT-BRD4募集的时间过程分析。与母体化合物VH298（即 MZ-1 的 VHL 识别域）共处理结果证实了本检测的特异性。由于 MZ-1 被竞争性置换，BRET 信号随VH298 浓度的增加而降低。
▍▏产品包装内容
NanoBRET™ Proteasomal Recruitment Starter Kit
HaloTag®-PSMD3 Fusion Vector
HaloTag® Control Vector (Negative Control)
NanoLuc®-BRD4 FL Fusion Vector (Positive Control)
检测试剂
• NanoBRET™ Nano-Glo® Detection System (0 – 2 h)
• NanoBRET™ Nano-Glo® Kinetic Detection System (2 – 24 h)
▍▏产品列表
NanoBRET™ 蛋白酶体募集检测
NanoBRET™ HaloTag融合蛋白载体
NanoBRET™ 对照载体
NanoBRET™ PPI HaloTag® 稳转细胞系
用于 NanoLuc® 靶蛋白融合的空白载体
NanoBRET™ PPI 检测试剂
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