【Promega】靶蛋白泛素化
通过泛素蛋白酶体系统（UPS）发生降解的靶蛋白，在转运到蛋白酶体前，需进行有效泛素结合。任何特定靶点上的泛素化水平（单泛素化和多聚泛素化）均有所不同，并由多种氨基酸连接介导。NanoBRET™ 可广泛确定所有类型的泛素化（泛素化程度和连接情况）。因此，重组 HaloTag®- 泛素融合蛋白和 NanoLuc®（Nluc）- 靶蛋白（T）融合蛋白可进行异位共表达，并在使用 PROTAC 处理后，检测相应 BRET 信号。本检测也可使用内源性标记的靶蛋白 - 供体融合进行。
▍▏检测工作流程
▍▏检测 PROTAC 诱导靶点泛素化的效能
PROTAC——dBET1（1 μM） 和 dBET6（0.1 μM） ——处理后异位表达的 HiBiT-BRD4 的 泛 素 化 —— 通 过NanoBRET™ 进行检测。相较于 dBET1，dBET6 的泛素化信号增加速度更快，强度更高，尽管其浓度比 dBET1低 10 倍。
▍▏产品包装内容
NanoBRET™ Ubiquitination Starter Kit
HaloTag®-Ubiquitin Fusion Vector
HaloTag® Control Vector (Negative Control)
NanoLuc®-BRD4 FL Fusion Vector (Postive Control)
▍▏检测试剂
• NanoBRET™ Nano-Glo® Detection System (0 – 2 h)
• NanoBRET™ Nano-Glo® Kinetic Detection System (2 – 24 h)
▍▏产品列表
NanoBRET™ 三元复合物检测
如目标是激酶、BET 家族或 HDAC 蛋白，请参见promega提供的多种预克隆 NanoLuc 融合载体。
NanoBRET™ Ubiquitination Assay
针对不同可用靶点(如 β- 连环蛋白、c-Myc)即用型检测试剂，请咨询 Promega。
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