【Promega】Lumit™ 技术
Lumit™ 技术
分析物的检测和定量通常使用耗时的多步骤方法，如 Westem bloting 和 ELISA。Lumit™ 技术是一种简单快速的多孔板均质免疫检测的替代方法。它的高特异性和易于高通量筛选 (HTS)使其成为科学家进行基础研究和药物发现的有力工具。
检测原理
Lumit™ 的基本原理是 NanoLuc® 二亚单元系统(NanoBiT®)。在 Lumit™免疫分析中，两种抗体分别用 NanoLuc® 萤光素酶的小亚基和大亚基(即 SmBiT 和 LgBiT)进行化学标记。直接或间接与分析物结合产生标记抗体的空间接近性，使 SmBiT 和 LgBi能够重组形成 NanoBiT®萤光素酶。在其底物 furimazine 的存在下，可以检测到明亮的发光，发光值与样品中待测物量成正比。
工作流程
特点及优势
●简单的均质型操作流程
√无需洗涤
√无需封闭
●检测分析物在:
√Buffer
√细胞培养基上清
√细胞裂解物
●在常规的可读板发光检测仪上检测信号
优势
●简单的加样-读数流程，无需洗涤步骤
●减少手动时间，快速出结果
●无需对孔板、磁珠、或者其他表面物质进行固定
●直接在细胞培养板中检测分析物
●灵敏的发光检测，动态范围宽
●常规的发光仪即可进行检测
●特异性高，背景信号低
●容易进行自动化处理，以及兼容高通量(96 孔和 384 孔板)
Lumit™ vs.常规的免疫检测
Lumit™免疫检测是快速的、基于孔板的加样-读数检测。无需洗涤步骤使得 Lumit™成为了传统的劳动密集型方法(如 ELISA和 Westemn Blot)的极好的替代方法。
获取高质量数据的捷径
应用和检测模式
不同的 Lumit™ 免疫检测模式支持多种不同应用。
应用
●生物样本中的分析物定量测定
●蛋白和小分子的竞争性结合研究
●蛋白质和小分子药物筛选
●信号通路激活的测定
●蛋白相互作用分析
●高通量筛选
●(HTS)
分析物定量
Lumit™ 技术具有多种不同检测模式，因此可对多种分析物进行定量分析。
(A)在间接检测模式下，来自不同种属的两个不同一抗对两个表位进行识别，并用 BiT标记的二抗进行检测。
该检测模式已经过全面充分验证，可用于细胞裂解物中的 PTM 分析，因此其也称为Lumitm lmmunoassay Cellular Systems.
(B)直接检测模式使用两种 BiT 标记的一抗。
对于涉及(C)BiT 标记的抗标签抗体或(D)BiT标记的链霉亲和素(旨在检测携带生物素的蛋白)等标记分析物，还具有其他形式的检测模式对其进行检测。
分析物相互作用
使用 Lumit™ 技术可轻松对两种分析物之间的二元相互作用进行探索分析。在竞争性信号缺失以及信号获得检测中，多种检测模式能够对分析物结合事件(例如蛋白:蛋白和蛋白:配体相互作用)进行相应测定和表征分析。
信号丢失结合免疫检测
Lumit™ 信号丢失结合检测系统用于测定体外样本中竞争性分析物的效价。
(A)在这种生化检测模式下，使用两种 BiT 标记的抗目标蛋白相互作用物的一抗测定竞争分析物(抑制剂)的效价。在加入竞争性分析物后，发光信号发生降低。Lumit™ SARS-CoV-2 RBD:hACE2 assay 使用此类型的检测设置。
(B)Lumit™ FcR Binding lmmunoassay 的设置是竞争性信号丢失检测的另一个示例。在该检测模式下，生物素化的 FcR与 SmBiT标记的链霉亲和素(SA-SmBiT)和 LgBiT 标记的抗体示踪剂(Tracer-Ab-LgBiT)结合。这能够通过竞争性置换 Tracer-Ab-LgBiT 测定分析物抗体(Ab-Analyte)对 FcR 的亲和力。
信号获得免疫检测
Lumit™ 信号获得检测系统用于对目标蛋白对的诱导剂
进行效价分析。在该检测模式下，两个 BiT 标记的抗目标蛋白对的一抗与 PPI诱导剂同时存在。两种蛋白的相互作用可导致发光信号出现相对增加。
点在看，传递你的品味
