【Promega】Calpain-Glo™ Protease Assay和Tryptase ( 类胰蛋白酶 )
Calpain-Glo™ Protease Assay
说明
Calpain-Glo™ Protease Assay (Calpain-Glo™ 蛋白酶检测试剂盒 ) 是一种均质的发光检测方法，用来测定 calpain 1 (m) 和 2 (m)的活力。Calpains 是一组钙激活的半胱氨酸蛋白酶的统称，这种酶可以在多种蛋白质剪切中发挥作用。Calpain 通过限定的蛋白水解过程来调控其作用底物的生物活性。
Calpain-Glo™ 蛋白酶检测试剂盒中提供一种琥珀酰 ( 该物质为发光前体，是钙蛋白酶 (calpain) 底物，即 Suc-LLVY- 氨基萤光素 )，储存于一种经过优化的缓冲液中。加入 Calpain-Glo™ 单溶液试剂，只需 “加样 - 混合 - 检测”三个步骤，即可使钙蛋白酶切割底物，并迅速进入萤光素酶反应，产生“辉光型”的发光信号。该发光信号的强弱与钙蛋白酶的活力成正比。此系统专为检测纯化的酶制剂而设计。
特点
• 快速得到结果：这种均质的酶偶联反应模式非常适合自溶酶 ( 如钙蛋白酶 ) 的测定；当酶完全作用时，反应 10 分钟后灵敏度达到最高。
• 操作简便：均质的“加样 - 混合 - 检测”三个简单步骤使得自动化操作成为可能。
• 灵敏度更高：该试剂盒比竞争性化学荧光检测试剂盒的灵敏度高出 1,000 倍。与化学荧光检测试剂盒相比，发光检测试剂盒避免了背景荧光信号的干扰，提供了完美的信号背景比。该试剂盒的线性范围超过钙蛋白酶浓度的 4 个数量级。
• 储存条件：避光储存于 -20℃。
含有Suc-LLVY序列的发光前体底物可以被calpain所识别。被calpain切割后，萤光素酶底物(氨基萤光素)就会释放出来与萤光素酶反应后产生发光信号。
Tryptase, Human, Recombinant, β
说明
Tryptase ( 类胰蛋白酶 ) 是肥大细胞颗粒中的主要蛋白，它可以在精胺酸和赖氨酸残基处剪切肽链。类胰蛋白酶在肥大细胞颗粒中的储存和释放依赖于激活效应。重组人表皮 βI 类胰蛋白酶 (rhSkin βTryptase) 与重组人肺 βII 类胰蛋白酶 (rhLung β Tryptase) 均是中性丝氨酸蛋白酶。人源 β 类胰蛋白酶已被成功克隆，并在毕赤酵母 (Pichiapastoris) 中表达，为具有活性的四聚体酶，经亲和层析纯化。这两种酶有不同的缓冲液配方、酶浓度和糖基化特征。提供的 rhLung Tryptase 溶于缓冲能力很低但浓度很高 (2mg/ml) 的缓冲液中，不含肝素，用于色谱分析。将这两种重组酶连同天然的肺类胰蛋白酶进行糖苷酶消化，然后使用 Western 分析，结果显示 rhLung Tryptase 的糖基化特征与尸酶非常相似。
特 异 活 性：以 0.4mM Nα CBZ-L- 赖 氨 酸 硫 代 苯 酯 作 底 物， 与Ellman's Reagent (5,5'-Dithio-bis(5-Nitrobenzoic Acid)) 共同应用时，在 1ml 的最终体积下，检测水解率，在 25℃条件下孵育 1 分钟 , 检测 410nm 处的吸光度值。1 个酶单位定义为每分钟 1.0 个吸光度值的变化。
rhSkin β 类胰蛋白酶 >1,000 u/mg 蛋白。
rhLung β 类胰蛋白酶 >1,200u/mg 蛋白。
浓度：
rhSkin b 类胰蛋白酶：200mg/ml；
rhLung b 类胰蛋白酶：2mg/ml。
特点
• 活性具有高特异性：比野生型的肺类胰蛋白酶高出 130-150%。
• 结果一致：重组蛋白的表达可确保不同批次的酶均衡一致。
• 安全：避免接触与野生型尸体类胰蛋白酶相关的人类病原体。
• 纯度高：表皮类胰蛋白酶 b 和肺类胰蛋白酶 b 不含其它污染蛋白质，每毫克蛋白酶活力高，避免野生型胰蛋白酶与外源蛋白相互作用。
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