【Promega】Caspase Inhibitor Z-VAD-FMK和Protease-Glo™检测试剂盒
Caspase Inhibitor Z-VAD-FMK
说明
Z-VAD-FMK (carbobenzoxy-valyl-alanyl-aspartyl-[O-methyl]-fluoromethylketone) 是一种可穿透细胞膜的泛 caspase 抑制剂 , 可与caspase 蛋白酶的催化部位发生不可逆结合，抑制细胞凋亡。如需达到抑制凋亡的目的 , Z-VAD-FMK 应在凋亡被诱导的同时加入。提供的 Z-VAD-FMK 以 20mM 溶于 DMSO, 可被方便地添加入细胞培养物或细胞提取物中。此肽的 P1 位点的天冬氨酸被甲基化，从而提高了稳定性和穿透细胞的能力。当在抗 Fas 单抗处理的 Jurkat 细胞培养模型系统使用时，推荐使用的 Z-VAD-FMK 浓度为 20mM。
储存条件：避光防潮保存于 -20℃。
Caspase Inhibitor Ac-DEVD-CHO
说明
Ac-DEVD-CHO 是 caspase-3/7 (DEVDase) 的抑制剂。对于不同的实验系统，抑制 caspase 活性的抑制剂浓度需由经验确定。
10mmol 抑制剂足够抑制凋亡的 THP-1 细胞提取物的 caspace 活性。Ac-DEVD-CHO 以溶于 DMSO 中的 10mM 溶液形式来提供。
储存条件：避光防潮保存于 -20℃。
Protease-Glo™ Assay
说明
Protease-Glo™ Assay (Protease-Glo™检测试剂盒 ) 是一种检测蛋白酶活性的新方法，该试剂盒采用一种经基因工程改造过的萤火虫 (Photinus pyralis) 萤光素酶，是 GloSensor™ 平台技术的一个代表。该试剂盒使用一种环状序列突变的萤火虫萤光素酶，即GloSensor™ -10F 蛋白，该分子上带有蛋白酶的识别位点，可作为蛋白酶底物。使用该检测系统时，可通过分子克隆和偶联的转录 / 翻译无细胞表达系统快速产生蛋白酶底物，从而很容易对蛋白酶功能作出评估。实验时，需设计出对蛋白酶识别序列进行编码的寡核苷酸，并将其克隆至 GloSensor™ -10F 基因上，后者位于线性载体上。然后，将包含目的蛋白酶位点的 GloSensor™ 蛋白在无细胞表达系统中合成出来，随后作为蛋白酶底物使用。蛋白酶识别序列被剪切后，激活了 GloSensor™ 蛋白，并产生发光。发光水平与蛋白酶活性具有相关性。Protease-Glo™ 检测试剂盒具有生物发光检测的优势：定量简单、灵敏度高，动态范围宽。访问以下网络应用程序，Protease-Glo™ 检测寡核苷酸设计工具：www.promega.com/techserv/tools/proteaseglo/，了解如何在 pGloSensor™ -10F 线性载体上创建您的目的蛋白酶识别位点，并使用无细胞翻译方法表达蛋白。
特点
• 灵活性：可与要求 P' 值的蛋白酶一同使用。
• 避免了荧光产生的背景问题：化学发光的物理和化学特性克服了荧光干扰所导致的问题。
• 灵敏度更高：发光容易实现，动态范围宽。
• 开放的平台系统：可创建您自己的蛋白酶识别底物。
• 可进行目的序列的评估：本系统是确定最佳蛋白酶识别序列或氨基酸置换效果的优秀工具。
• 网络应用：使寡核苷酸设计变得迅速且容易；仅需输入目的氨基酸序列即可。参见：www.promega.com/techserv/tools/proteaseglo/。
• 储存条件：除 TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Master Mix 需储存于 -70℃之外，将所有组分储存于 -20℃。
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