【Promega】质谱分析标准参照试剂 Reference Reagent for MS
蛋白质组学研究用仪器性能的全面监测需要复杂的蛋白质参照物。而全细胞蛋白提取物就提供了所需的复杂性。Promega 提供来源于酵母和人类细胞的质谱兼容的全细胞参照品蛋白提取物，该产品以预消化冻干形式提供，便于使用。对于 MS 仪器灵敏度和动态范围以及各种 LC 参数的常规报告，我们建议使用 6x5 LC-MS/MS Peptide Reference Mix 。
6 × 5 LC-MS/MS Peptide Reference Mix
该产品是 30 个肽的混合物：6 组具有 5 个相同肽序列的同位素标记的肽组成，只是序列中稳定的重标记氨基酸的数量不同。在色谱上，每种同位素都是不可区分的；然而，由于它们在质量上的差异，它们可以被质谱法清晰地分辨出来。
6 × 5 LC-MS/MS Peptide Reference Mix 配合工具软件使用，可便捷地评估液相色谱柱功能和质谱仪器性能 , 包括灵敏度和线性范围。
• 同位素标记为 13C 和 15N 原子 .
• 同位素在色谱上无法区分，但由于其质量不同，在质谱上可区分。
• 每种肽的同位素以 10 倍梯度稀释形式提供。这个模式使
仪器的线性范围和灵敏度评估成为可能。
6 × 5 LC-MS/MS Peptides 经过了 AAA 分析认证，可用于精确监测并与多种应用兼容，单一样本或复杂的混合物。
浏览下方一篇 ACS Analytical Chemistry 杂志的文章，了解 更 多 产 品 的 应 用 信 息：Reagent for Evaluating LiquidChromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS)Performance in Bottom-Up Proteomic Experiments.
PReMiS™软件的工作流程
上图显示了使用 6 × 5 LC-MS/MS Peptide Reference Mix 和 PReMiS™ 软件分析产生数据的标准工作流。
PReMiS™ 软件分析可实现 :
•省去了耗时的手工计算时间。
•确保仪器性能随时间的推移保持一致。
上图：兼容纯品和复杂混合物。
•使用纯品模式进行标准仪器监测。
•将肽混合物加入复杂样品（如人体细胞提取物）中，用相关实验样品监测仪器性能。上图数据显示了在纯样品和复杂混合样品中确定准确保留时间。使用Promega 提供的 PReMiS 软件，在纯样本评估模式下（上样 500fmol）和加入人 K562 细胞提取物（1pmol）时检测保留时间。
质谱兼容型酵母和人类蛋白质提取物
质谱兼容型酵母和人类蛋白质提取物是为质谱分析而特殊设计，酵母蛋白提取物适用于研究相对小规模和研究已经较为深入的蛋白质组，而人类蛋白质提取物适用于动态范围宽泛而且复杂的蛋白质组研究。每种蛋白提取物又分为预消化型和完整型两种形式：
• Digest 型 - 预消化型提取物：被预消化并经固相萃取净化的蛋白提取物，用于液相色谱 / 质谱 (LC / MS) 分析。
• Intact 型 - 完整型蛋白提取物：用于蛋白质谱样品制备的优化。
应用：通过对各种蛋白和肽类的定量和定性检测 ( 包括 LC/MS 和氨基酸分析法 ) 可以监控提取物的批次间稳定性。通过监测非特异性蛋白片段，非生物翻译后修饰等生产流程确保产品与反相液相色谱和质谱兼容。
LC-MS 性能监测
Promega 的蛋白提取物作为蛋白复合物参照物，可提供稳定一致的质谱保留时间、信号强度和其他关键的性能指标。
稳定的蛋白提取物质谱分析结果。
上图所示：每次使用 1μg 人蛋白提取物 ( 预消化型 ) 注射入仪器。肽段经过 2 小时的梯度分解。每周监测提取物所确认的仪器性能。
可靠的可重复性的数据
提取物的批次间稳定性是通过各种蛋白和肽的定性定量方法来监测，包括 LC-MS 和氨基酸分析。我们的生产流程通过监测非特异性蛋白片段，非生物性翻译后修饰和对于消化型提取物的最小化非消化肽段来确保产品与 LC-MS 的兼容性。
方法学建立的模型系统
Promega 的蛋白提取物产品可以提供用于建立和优化不同样本提取方法的理想模型系统，包括同位素标记和富集。
上图：同位素标记方法建立举例。3 份人 K562 细胞预消化蛋白提取物分别以 3个不同的 TMT 同位素标签标记 (TMT126, TMT127 和 TMT128) 并以 10:5:1 的比例混合。同位素标签之间的相对定量比例以质谱检测。数据显示，预期的与实际的蛋白定量比例之间有良好的相关性。
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