【Promega】低 pH 蛋白消化
AccuMAP™ Low pH Protein Digestion Kit
非酶翻译后修饰（PTMs）是生物治疗用蛋白在生产和储存过程中会自发发生的情况。主要的非酶 PTM 包括脱酰胺、二硫键干扰和氧化。这些修饰会影响生物治疗用蛋白的疗效和稳定性，是需要监测的情况。非酶 PTMs 也可以在制备肽图谱的蛋白质样品制备过程中产生并影响分析。样品制备过程中引起非酶 PTMs 的主要原因包括碱性 pH 和具有蛋白质氧化活性的杂质。
▍▏特点
• 可在 4.5-5 小时内完成蛋白样本制备。
• 高度可重复的蛋白消化结果。
• 可用于还原性蛋白和非还原性蛋白消化。
上图：当在还原或非还原条件下的低 pH 值情况里进行样本制备时，AccuMAP™ Low pH Protein Digestion Kits 能抑制人为造成的非酶 PTMs。
▍▏低pH 条件下的蛋白消化
通常用于肽谱分析样品制备时，胰蛋白酶和其他蛋白酶在碱性 pH 值条件下更有效地消化蛋白质。为了避免在这些条件下诱发人工非酶性 PTMs，我们研发了在低 pH 条件下进行胰蛋白酶消化的方法。为了恢复赖氨酸位点的胰蛋白酶切割效率，我们用一种特殊的、低 pH 抗性的重组 Lys-C（rLys-C）蛋白酶来辅助胰蛋白酶。通过在胰蛋白酶中添加耐低 pH 的rLys-C，我们在低 pH 下获得了高效的胰蛋白酶消化。
上图：低 pH 条件下，改良胰蛋白酶和 AccuMAPTM Low pH Resistant rLys-C 的高效消化 。利妥昔单抗根据常规消化说明书（pH 8）或 AccuMAPTM Low pH Protein Digestion Kit 进行消化，用 LC/MS 进行分析。结果表明，低 pH 条件下的消化与常规条件下的消化相当。
▍▏抑制脱酰胺和二硫键干扰
上图：显示以传统条件 (pH 8) 和低 pH 条件使用 AccuMAPTM Low pH Protein Digestion Kit) 从利妥昔单抗中获得的 GLEWIGAIYPGNGDTSYNQK 肽段的萃取离子层析色谱。左图显示了脱酰胺的抑制，右图显示了二硫键干扰的抑制。
点在看，传递你的品味
