【Promega】Lumit™ Anti-Tag Antibodies /Streptavidin
描述和应用
抗标签 Lumit 试剂包括一系列针对常见蛋白标签(例如，His-、Flag-、GST-tag和人 Fc)的 BiT 标记抗体以及 BiT 标记的链霉亲和素。使用这些试剂能够轻松实现对生化检测系统的设置，从而对蛋白:蛋白相互作用(PPI)进行研究，并筛选调控这些相互作用的分子。此外，可通过便捷、竞争性和 HTS 兼容的检测模式对蛋白:小分子相互作用进行研究分析。
PPI分析原理
原理和工作流程
在对蛋白相互作用进行研究时，需对两个使用不同标记的蛋白进行孵育。也可选择加入调控目标PP!的化合物。随后，加入 BiT标记的 Lumit™ 抗标签抗体。加入Lumit™ 检测试剂后，在发光检测仪上记录产生的发光信号。当使用 AviTag™ 标记蛋白或生物素化蛋白时，可使用一种 BiT 标记的 Lumit™ 抗标签抗体替代链霉亲和素 -LgBiT/-SmBiT。
在研究蛋白质:小分子相互作用时，需要使用生物素化小分子示踪剂)和标记蛋白。用 BT 标记的抗标签抗体和链霉亲和素 -LgBiT/-SmBiīT 检测示踪剂和靶标之间的相互作用。由竞争性示踪剂置换导致的发光信号降低可确定未标记测试化合物的靶标结合情况。
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代表数据
监测 PROTAC 诱导的蛋白相互作用
在 Lumit™ 免疫检测系统中评价了 PROTAC dBET1和 dBET6诱导 Cereblon E3 连接酶和 BRD3(BD2)之间形成三元复合物的能力。将分别用 GST-和 FLAG-标记的重组BRD3(BD2)(6.25nM)和 Cereblon(6.25nM)与不同浓度的 PROTAC孵育60 分钟。孵育结束后，使用 Lumit™Anti-GST-LGBiT、Lumit™Ant-FLAG -SmBiT 和 Lumit™ lmmunoassay Detection Reagent A 进行了检测。
蛋白质:小分子相互作用的检测和表征
使用竞争性 Lumit™ 免疫检测系统测定了不同激酶抑制剂对 Bruton 酪氨酸激酶(BTK)的相对结合亲和力。将使用 His 标记的重组 BTK(5nM)与不同浓度(0.003~5000uM)的生物素化伊布替尼(示踪剂;37.5nM)和激酶抑制剂一起孵育 60 分钟同时轻轻搅拌。用链霉亲和素-LaBiT和 Lumit™ Anti-6His-SmBiT 的混合物孵育样本 30 分钟。加入Lumit™ Immunoassay Detection Reagent A后，可检测平衡状态下与示踪剂结合的 BTK部分。
Product Box
Lumit™ Anti-6His-LgBiT and -SmBiT
Lumit™ Anti-GST-LgBiT and -SmBiT
Lumit™ Anti-Flage-LgBiT and -SmBiT
Lumit™ Anti-Human lgG-LgBiT and -SmBiT
Lumit™ Streptavidin-LgBiT and -SmBiT
Combine with Lumit™ Detection Reagent A
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