【Promega】SARS-CoV-2 Protein: Protein Interaction lmmunoassays

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promega Lumit SARS-COV-2 RBD SARS-CoV-2 SARS-CoV-1

SARS-CoV-2 Protein: Protein Interaction lmmunoassays

Lumit™ SARS-COV-2 RBD: hACE2 Immunoassay

描述和应用

Lumit SARS-COV-2 RBD: hACE2 Immunoassay 可检测 SARS-COV-2 刺突蛋白的受体结合域(RBD)和人血管紧张素转化酶2(ACE2)蛋白之间的相互作用。这种相互作用是宿主细胞感染的基础这一事实使其成为治疗性干预的重要靶点。该生化、HTS兼容检测系统用于筛选 RBD:hACE2 相互作用抑制剂，并作为替代中和试验用于监测恢复期患者或接种相关疫苗个体血浆或血清中的中和抗体(NAb)。

检测原理

原理和工作流程

Lumit™ SARS-COV-2 RBD: hACE2 Immunoassay利用重组兔Fc-RBD(rFC-RBD)和小鼠,Fc-hACE2(mFc-hACE2)融合蛋白其分别被 Lumit 抗免 -SmBiT和抗小鼠-LgBiT 抗体识别。从发光信号的相对降低可以明显确定对相互作用产生负面影响的分子将重组 rFC-RBD 和样本进行充分混匀后，然后加入其他检测组分。生物发光信号可使用传统发光检测仪进行记录。

检测工作流程

代表数据

候选治疗性抗体的筛选

在单次给药时筛选了15种市售抗 SARS-CoV-1 或 SARS,CoV-2 抗体/抗体片段的小型迷你文库。然后将数据归一化为无抗体对照(对照1)。根据抗体阻断 RBD:ACE2相互作用的效价(即较强抑制、部分抑制和弱/无抑制等)对其进行了分组。使用抗 SARS-CoV-2 核衣壳抗体(对照 2)证实了检测系统的特异性，

患者样本中的中和抗体检测

对来自威斯康星州麦迪逊(美国)的大流行爆发前样本(n=43)和 PCR 阳性血浆样本(n=41)队列进行了分析。加入其他检测组分前，将样本稀释液(1:20)与 RBD-rFc在室温条件下预孵育 30 分钟。阈值设定为 30% 中和水平，所得结果显示检测系统的检测特异性为 100%。检测灵敏度为 78%。

监测 SARS-CoV-2 变体的抗体中和有效性

研究人员比较了抗 SARS-CoV-2 刺突抗体中和不同目标变体的效价。与野生型相比，α变体固有的 RBD 突变似乎不会对中和造成显著影响，而 β和γ变体 RBD 内的突变几乎完全消除了抗 SARS-CoV-2 刺突抗体的中和效价。