【Promega】pTARGET™ Mammalian Expression Vector System
说明
pTARGET™ Mammalian Expression Vector System (pTARGET™哺乳动物表达载体系统 ) 是一个在哺乳动物细胞中便于克隆 PCR 产物并将其表达的系统。此载体是通过 EcoRV 酶切 pTARGET™ 载体，并在两个 3' 末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点单个 3'-T 的突出端在两方面极大提高了 PCR 产物与质粒连接的效率：第一，3'-T 突出端可以防止载体的自身环化；第二，为某些热稳定性聚合酶产生的PCR 产物提供一个匹配的突出端。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的 3' 端加上一个脱氧腺苷酸。pTARGET™ 载体还包含一段经过修饰的 β - 半乳糖苷酶的 α - 肽编码区，从而使重组子也能使用蓝 / 白筛选。
pTARGET™ 载体带有人巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 即刻早期增强子 / 启动子区域，能启动克隆 DNA 的插入片段在哺乳细胞中组成型表达。此载体还含有新霉素磷酸转移酶基因，是哺乳动物细胞的一个筛选标记。pTARGET™ 载体使用抗生素 G-418 筛选转染细胞，能用于瞬时表达或稳定表达。
特点
• 简单的 PCR 克隆："T" 突出端允许热稳定性酶 ( 如 Taq DNA 聚合酶 ) 生成的 PCR 产物直接进行连接反应。
• 强组成型表达：CMV 增强子 / 启动子区域可以在许多细胞类型中进行强组成型表达。在转基因小鼠中，28 个检测的组织中有 24个能观察到 CMV 增强子 / 启动子调控的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase, CAT) 基因的表达。此载体在细胞中以游离体形式表达 SV40 大 T 抗原 (SV40 largeT antigen)，能获得更高的表达水平。
• 蓝 / 白斑筛选：重组子克隆易于筛选。单酶切就能除去插入DNA。
• 稳定的转染子：pTARGET™ 载体含有新霉素磷酸转移酶基因，能筛选稳定的转染子。
• 储存条件：感受态细胞储存于 -70℃；其它组分储存于 -20℃或 -70℃。
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