【Merck & Roche】基因组学：RT-PCR / RT-qPCR产品系列

浏览量：865

MERCK ROCHE TOSRTRO 11855476001 TRANSRTRO 10109118001 5893151001 11483188001

RT-PCR / RT-qPCR

逆转录酶PCR（RT-PCR）是PCR的一种变体，除PCR试剂外还需采用逆转录酶来扩增特定mRNA序列。通过一条引物退火合成第一链从而形成cDNA拷贝后，通过PCR/qPCR合成dsDNA。

一步法

在一步法 RT-PCR/RT-qPCR中，逆转录酶步骤与 PCR反应在同一管中进行，便于在单孔中对靶基因和对照进行多重分析。一步法反应易于构建，可最大限度缩短实操时间以减少人为错误和污染可能,通常被视作高通量筛选最佳选择。这种方法同样非常适合重复执行小量检测的工作流程。

转录子一步法RT-PCR试剂盒

转录子一步法RT-PCR试剂盒包含四种不同的酶，用于快速、灵敏、特异的RNA终点法分析。转录子逆转录酶可确保灵敏稳健的逆转录，同时保证高产量。Protector RNA酶抑制剂可在逆转录过程中最大限度保护模板，而ExpandTM系统(由TaqDNA聚合酶和校对聚合酶组成的混合物）可最大限度避免突变，从而为PCR提供高产量和高保真度。

●可检测低至1 fg的总RNA

●包含出色的RNA酶抑制剂，在高温下具有完全活性

●专有的热启动缓冲液，可实现高特异性并减少引物二聚体形成

图1：高灵敏度转录复杂模板。

（A）使用转录子一步法RT-PCR试剂盒逆转录不同量（低至1fg）的HeLa总RNA。根据试剂盒标准RT-PCR实验方案（+50°C逆转录30分钟），使用针对人类28S核糖体RNA的特异性引物（GC含量64%）扩增389bp片段。琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色后获得的清晰条带，证明该试剂盒可高灵敏度转录极少量(1 fg）的模板。

Titan™ 单管RT-PCR系统

●灵敏、快速和可重复的RNA分析

●与Taq DNA聚合酶相比，保真度高三倍

●高效率酶带来出色灵敏度

两步法

在两步法 PCR 中，首先通过逆转录产生 cDNA，然后将其加入PCR 反应。这种高度灵敏技术的每个步骤都依赖于单独的优化缓冲液，通常建议需要最佳逆转录和 PCR 性能的反应使用。两步法 PCR 可保存 cDNA 供将来使用，常用于研究每个样品中的多个靶标。

图 2: 在常规PCR仪上通过两步法RT-PCR检测小鼠β-肌动蛋白mRNA。

转录子逆转录酶

转录子逆转录酶推荐用于长靶标(最大14kb）、稀有靶标和富含GC的序列，且由于其适用于多种修饰的核苷酸，也可用于制备标记cDNA。该酶可用于高灵敏度的两步法RT-PCR，适用于常规PCR仪和实时PCR仪器。

●生成含大插入片段的cDNA文库

●可在高温（最高65°C）下使用

●适于在 cDNA合成过程中标记Cy3、Cy5、DIG、生物素和氨基烯丙基

逆转录酶AMV

作为禽成髓细胞瘤病毒RNA基因组的基因产物，逆转录酶AMV 的成熟形式包含RNA定向DNA 聚合酶、DNA 依赖性DNA聚合酶、RNaseH、以及解旋活性。该酶可用于cDNA合成、后续扩增反应的第一链cDNA合成、双脱氧 DNA测序、RNA测序、DNA片段3'末端标记、以及基因组足迹 ss 探针合成。

●适用于多种应用

●可用于具有复杂二级结构的转录本

●经cDNA合成和RT-PCR功能测试

转录子通用cDNA预混液

转录子通用cDNA预混液包含一种独特的宽温范围酶，适于高温逆转录一一即使面对复杂RNA模板，也可表现出高特异性和灵敏度。两步法PCR所需的所有试剂均在两个小管中提供，最大限度减少了移液步骤。该产品结合RealTime™ ready 细胞裂解试剂盒使用时，可直接用于细胞裂解液。

● 轻松构建反应，仅需添加RNA

●兼容高达65°C的孵育温度

●适用于低至0.1 pg的靶标总RNA量

用于RT-PCR的cDNA第一链合成试剂盒 (AMV)

cDNA第一链合成试剂盒适用于序列特异性引物、poly(dT)15引物或随机引物，可用于生成cDNA的第一条链，从而作为两步法RT-PCR的起始反应。禽成髓细胞瘤病毒（AMV）逆转录酶具有很高的热稳定性，可在42°C下进行反应，从而具有更高的特异性和二级结构分辨率。

●热稳定酶可增强二级结构的分辨率

●兼容序列特异性引物、poly(dT)15引物或随机引物

●可以与PCR结合使用，以检测是否存在RNA病毒

货号	产品
TOSRTRO	转录子一步法RT-PCR试剂盒
11855476001	Titan™单管RT-PCR系统
TRANSRTRO	转录子逆转录酶
10109118001	逆转录酶AMV
05893151001	转录子通用cDNA预混液
11483188001	用于RT-PCR的cDNA第一链合成试剂盒(AMV)