【Genovis】FabDELLO™ 冻干酶,特异性酶切人IgG1

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GingisREX (RgpB)是一种精氨酸特异性蛋白酶,可以消化蛋白质C端精氨酸残基,包括精氨酸-脯氨酸连接,这是其他酶难以消化的。该酶可用于肽定位、肽从头测序和翻译后修饰分析。

◆◆消化任何含有精氨酸的肽或蛋白质。对Arg-Xmotifs具有特异性

◆◆消化Arg C端残基

◆◆60分钟反应

◆◆酶活条件:6 M urea and 0.1% SDS


蛋白内切酶工作流程

ginisrex是一种半胱氨酸蛋白酶,专门消化精氨酸残基的末端肽键,包括脯氨酸相邻的位点。与胰蛋白酶消化相比,产生了更长的肽段,可以通过高分辨率的质谱进行分离和鉴定。这为自下向上(Bottom-up)的方法提供了更多的样品制备的选择,可以选择替代的酶切/消化工作流程,并增加序列覆盖。GingisREX不具有通常使用Arg-C观察到的活性肽嘧啶。该酶在5.0- 9.0的pH范围内是高活性的,需要有半胱氨酸,但可被盐酸胍抑制。


产品形式

冻干酶

用于消化精氨酸残留物C端


使用GingisREX®进行精氨酸特异性消化

对于自底向上(Bottom-up)质谱数据的解释通常基于消化样品的蛋白酶具有特异性的假设。非特异性的酶活会产生不确定性,使数据解释变得困难,增加分析时间和错误解谱的风险。我们使用氧化胰岛素 β链作为一种非常简单的模型底物,比较了GingisREX和Arg-C的活性。氧化后的胰岛素β链只含有一个精氨酸和一个赖氨酸残基,因此只能在一个位点上被精氨酸特异性蛋白酶消化。当用反相高效液相色谱和质谱分析由GingisREX和Arg-C产生的多肽时,GingisREX在精氨酸残基上显示出特异性消化,而在赖氨酸残基上没有活性,即使在高酶底物比(1:5)长时间孵育过夜后也没有其他非特异性活性。相比之下,Arg-C在精氨酸残基上表现出主要活性,但也可以消化赖氨酸残基和其他一些次要位点。


使用GingisREX®进行治疗性抗体的肽图绘制

对于大而复杂的样本,如治疗性抗体,精氨酸残基的消化会产生更大的肽段,并导致肽图中较少的峰。这里,展示了曲妥珠单抗的GingisREX和Arg-C消化谱。通过GingisREX在Arg位点的消化,可以得到更少的峰和更简单的肽图谱,这一特征有利于大规模指纹图谱分析的数据解释。

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