【AKADEUM】Dead Cell Removal Microbubble Kit (Cat.11510-211)
死细胞污染在各种样品中很常见，包括分离的组织、全周血液或白细胞样品。死细胞会对样品的功能性产生负面影响，并可能导致期望的细胞进入凋亡状态。通过去除死细胞，细胞群体在处理后将表现出改善的存活率和功能性能。死细胞会干扰单细胞测序、流式细胞术和细胞培养，产生噪音并影响扩增。使用Akadeum的去除死细胞试剂盒，确保干净的起始材料，无死细胞污染，以获得准确的结果。
应用原理
Akadeum通过使用结合了Annexin V的BACSTM微泡，通过选择性地捕获暴露磷脂酰丝氨酸（PS）的细胞来实现死细胞的有针对性去除。一旦与样品混合，BACSTM去除死细胞微泡捕获死细胞并将其浮到表面进行去除，使未受影响的感兴趣细胞保持健康，有了Akadeum的尖端微泡技术，您可以在短短25分钟内去除死细胞，让您感兴趣的细胞保持完好，并准备好进行下游应用。
成分详情
操作前说明
● 该操作已经针对起始存活率为35%或更高的样品进行了优化。对于存活率低于35%的样品，请联系techsupport@akadeum.com。
●为了获得最佳结果，在细胞分离之前，请将样品通过30微米的细胞筛滤器过滤，以获得单细胞悬浮液。
● 死细胞去除结合缓冲液不含偶氮。细胞隔离应在无菌条件下进行。
● 有关如何真空吸取BACS™微泡层的技巧，请参阅视频：https://www.akadeum.com/videos/aspiration
● 该操作适用于起始样品包含0.5 x 106至25 x 106总细胞（活细胞和死细胞）。对于超出此范围的样品，请联系techsupport@akadeum.com。
细胞准备
① 计算总细胞数（活细胞和死细胞）并进行离心。
② 用每1 x 106总细胞数的20微升DCR（Dead Cell Removal）结合缓冲液重新悬浮细胞沉淀，如表所示。
③ 如果不在1.5毫升管中，将其转移至1.5毫升管中。根据表中所示的细胞数范围来划分或分装样品。
④ 根据表中所示的细胞数，向标记的样品中每1 x 106总细胞数加入20微升BACS微泡（蓝色盖子）。
⑤ 添加DCR结合缓冲液，使最终体积达到1000微升，如表所示。
⑥ 在20 rpm的离心机上将样品在室温（或4°C）下搅拌15分钟。
结合BACS™ 微泡
① 添加2微升1M氯化钙（橙色盖子）。
注意：为了获得最佳结果，在加入氯化钙后，重要的是在不间断的情况下继续进行操作。
② 通过移液或手动翻转重新悬浮BACS™微泡（蓝色盖子）。立即进行第3步。
注意：在将BACS™微泡添加到每个样品之前，必须立即彻底重新悬浮。可以通过使用1毫升移液管来移液或多次翻转来实现重新悬浮。
③ 根据表中的指示，向标记的样品中每1 x 103总细胞数添加20微升BACS™微泡（蓝色盖子）。
④ 添加DCR结合缓冲液，使最终体积达到1000微升，如表所示。
⑤ 在室温（或4°C）下，在离心机上以20 rpm搅拌样品15分钟。
细胞分离
① 以400 x g的速度离心样品5分钟。
注意：建议使用摇摆离心机转子。
② 用真空吸取器吸取BACS™微泡层和上清液，注意不要干扰细胞沉淀。一旦吸取了BACS™微泡，可用移液管移除上清液。
注意：有关如何去除BACS™微泡的技巧，请参阅视频：https://www.akadeum.com/videos/aspiration
③ 用所需的缓冲液或培养基重新悬浮细胞沉淀，并转移到干净的管中。
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